Studie identifiziert neuen Topogeneseweg für die Faltung und den Zusammenbau von Membranproteinen mit mehreren Spannweiten

Forscher um Prof. Zhang Zairong vom Shanghai Institute of Organic Chemistry der Chinesischen Akademie der Wissenschaften haben einen posttranslationalen Topogeneseweg für die Faltung und den Zusammenbau von Multi-Spaning-Membranproteinen (MSPs) identifiziert.

Von den etwa 5.000 Membranproteinen, die an der Membran des endoplasmatischen Retikulums (ER) menschlicher Zellen synthetisiert werden, sind mehr als die Hälfte MSPs, die eine entscheidende Rolle in der Zell- und Organismusphysiologie spielen und als Ionenkanäle, Transporter, Rezeptoren und intramembranäre Enzyme fungieren.

Ein erheblicher Teil dieser Funktionen beruht auf polaren und geladenen Aminosäuren, was zur Bildung von schwach hydrophoben TMDs (pTMDs) führt. Allerdings stehen pTMDs vor der Herausforderung, vom Sec61-Translokon, das hydrophobe TMDs bevorzugt, erkannt und in die Phospholipiddoppelschicht integriert zu werden.

Im menschlichen Proteom enthalten etwa 30 % der Membranproteine ​​und mehr als 50 % der MSPs mindestens ein pTMD. Wie diese pTMDs effektiv identifiziert und präzise in ausgereifte MSP-Strukturen verpackt werden, war eine wichtige wissenschaftliche Frage.

Anhand des sechsspannigen Protein-Adenosintriphosphat-bindenden Kassettentransporters G2 (ABCG2) als Modell fanden die Forscher heraus, dass das pTMD2 von ABCG2 während der kotranslationalen Translokation durch die zentrale Pore des Translokons in das ER-Lumen gelangt, anstatt darin integriert zu werden die Phospholipid-Doppelschicht durch das laterale Tor des Translokons.

Dies führt dazu, dass stromabwärts gelegene TMDs mit umgekehrter Ausrichtung in die ER-Membran eingefügt werden, wodurch ein einzigartiges Zwischenprodukt entsteht. Nach der Translation der C-terminalen positiv geladenen Zwillings-Lysinreste kommt es zu einem nahezu globalen topologischen Umlagerungsprozess.

Die Affinitätsreinigung zeigte, dass ATP13A1 das C-terminale positive Ladungssignal von ABCG2 erkennen kann. Der Ersatz von Lysinresten durch negativ geladene oder neutrale Aminosäuren schwächt die Wechselwirkungen zwischen ATP13A1- und ABCG2-Mutanten erheblich ab.

Darüber hinaus führte das Ausschalten von ATP13A1 offensichtlich zur Anhäufung fehlgefalteter ABCG2-Konformationen, vor allem solcher mit fehlorientiertem TMD6 innerhalb der ER-Membran. Somit spielt ATP13A1 eine entscheidende Rolle bei der Topogenese von MSPs, wo seine ATPase-Aktivität die Verlagerung des fehlorientierten TMD6 aus der Lipiddoppelschicht in das Zytosol fördert.

Anschließend wird das zytosolische TMD6 wieder in die ER-Membran integriert und treibt dadurch die posttranslationale topologische Neuordnung anderer vorgelagerter TMDs voran.

Bei erfolgreicher Umlagerung der TMDs 4–6 kann das Zwischenprodukt zu einer Quartärstruktur oligomerisieren. Dieser Prozess erleichtert wahrscheinlich die Integration von pTMD2 in die endgültige Struktur aus dem wässrigen ER-Lumen und in die reife Struktur, die von umgebenden TMDs eng umhüllt ist.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Studiejetzt veröffentlicht in Molekulare Zelleerklärt, wie ein „schwieriges“ pTMD zur Insertion kotranslational übersprungen und im späten Faltungsstadium posttranslational in die endgültige korrekte Struktur eingebettet wird, wodurch eine übermäßige Lipidexposition vermieden wird.

Insbesondere aufgrund der Exposition von pTMD2 gegenüber dem ER-Lumen während der ABCG2-Topogenese kann die durch die ABCG2-S441N-Genmutation verursachte N441-Glykosylierungsmodifikation die pTMD-Assemblierung im späten Stadium der Topogenese erheblich blockieren. Da ABCG2 ein Harnsäuretransporter ist, erklärt diese Studie, wie diese Mutation eng mit menschlichen Krankheiten wie Gicht und Hyperurikämie verbunden ist.