Neubewertung dessen, was wir von Peptiden bei der Krankheitserkennung erwarten können

Anhand von Blutuntersuchungen ist es möglich, seltene genetische Erkrankungen zu erkennen, Krebs zu erkennen oder den Entzündungsgrad im Körper zu bestimmen. Darüber hinaus werden aufgrund der rasanten Entwicklung der medizinischen Diagnostik auf Basis der Bioflüssigkeitsanalyse weltweit zahlreiche Anstrengungen unternommen, medizinische Ansätze anzupassen und die personalisierte Medizin zum Paradigma der zukünftigen Gesundheitsversorgung zu machen.

Auf diesem Weg präsentierten Wissenschaftler des Instituts für Physikalische Chemie der Polnischen Akademie der Wissenschaften (IPC PAS) ihre Forschung zu einzigartigen Peptiden für den Einsatz in neuartigen Sensoren zur schnellen und einfachen Erkennung vieler Krankheiten.

Eine Entzündung ist der natürliche Abwehrmechanismus des Körpers gegen Krankheitserreger oder schädliche Chemikalien, die akute Symptome wie Schmerzen, Schwellungen, Rötungen oder Blutergüsse verursachen. Dieser Mechanismus beinhaltet die intensive Produktion spezifischer Moleküle wie Zytokine durch den Körper, die gegen Infektionen eingesetzt werden, und Entzündungen können anhand solcher Symptome leicht diagnostiziert werden.

Einige entzündliche Reaktionen sind jedoch nicht sichtbar und können viel länger andauern als eine plötzliche Infektion. Bleiben Entzündungszellen über einen längeren Zeitraum bestehen, kann sich eine chronische Entzündung entwickeln. Chronische Entzündungen können auf eine Vielzahl von Gesundheitsproblemen hinweisen, darunter Autoimmunerkrankungen und Krebs, die schwer zu bekämpfen sind.

Der Nachweis des Entzündungsprozesses im Körper lässt sich leicht anhand des Blutes durchführen, während die Überwachung des Entzündungsverlaufs eine ganz andere Sache ist. Normalerweise wird die Infektionsrate anhand des Spiegels des C-reaktiven Proteins, bekannt als CRP, bewertet, einem häufigen, früh auftretenden Biomarker für verschiedene Entzündungszustände im Körper.

Sein Auftreten im Plasma basiert auf der Reaktion des Körpers auf den erhöhten Zytokinspiegel während einer Entzündung, wenn die Leber CRP produziert. Sein Wert kann auch die Ursache einer Entzündung erkennen; Beispielsweise kann ein Anstieg des CRP-Spiegels auf Virusinfektionen zurückzuführen sein, während ein sehr hoher Wert für bakterielle Infektionen charakteristisch ist.

Der Blutspiegel dieses ringförmigen Moleküls verändert sich bei jeder Entzündungsabwehr schnell und deutlich, nicht nur bei Infektionen, sondern auch als Reaktion auf Gewebeschäden, die ebenfalls Entzündungen in allen Gewebearten auslösen. Bisher kann die Überwachung der CRP-Werte wertvolle und präzise Informationen über den Krankheitsverlauf liefern.

Auf diesem Gebiet untersuchte eine Forscherin des IPC PAS, Dr. Katarzyna Szot-Karpińska, die Protein-Peptid-Wechselwirkungen, insbesondere zwischen CRP und CRP-bindenden Materialien. Sie konzentrierte sich auf Peptide aufgrund ihrer höheren Stabilität unter rauen Bedingungen gegenüber Abbau, geringeren Kosten und der Möglichkeit einer effizienteren Verwendung in biomedizinischen Sensoren als Antikörper, die die häufigsten CRP-Rezeptoren sind.

In einem in der Zeitschrift veröffentlichten Artikel Analytische Chemie, verwendeten die Forscher eine Phagen-Display-Methode, um CRP-bindende Phagen zu identifizieren. Die Identifizierung solcher Phagen ermöglicht die Bestimmung der Sequenz von Peptiden, die auf der Oberfläche der Phagen exponiert sind und eine hohe Affinität gegenüber CRP aufweisen.

Ein wesentlicher Treiber der Studie war die Frage der Überwachung langfristiger Entzündungen mithilfe einer elektrochemischen Plattform, die mit stabilen Molekülen als Alternative zu Antikörpern modifiziert wurde. Die ausgewählten Peptide wurden synthetisiert und vollständig charakterisiert, und ihre Wechselwirkungen mit CRP wurden untersucht, was zur Identifizierung der drei vielversprechendsten von Phagen abgeleiteten CRP-bindenden Moleküle führte.

Das Peptid mit der höchsten Affinität zu CRP wurde zur späteren Verwendung als elektrochemischer CRP-Sensor auf Elektroden immobilisiert. Biologische und physikalisch-chemische Techniken wurden eingesetzt, um die Mechanismen von Protein-Peptid- und Protein-Peptid-Wechselwirkungen zu verstehen.

Dr. Katarzyna Szot-Karpińska, eine Wissenschaftlerin, die an diesem Projekt arbeitet, sagte: „In unseren Studien haben wir zum ersten Mal gezeigt, dass ein einzelnes 12-mer-Peptid, das aus einer Phagenbibliothek identifiziert wurde, für die CRP-Erkennung verwendet wurde. Die identifizierten Peptide.“ wurden charakterisiert und ihre Wechselwirkungen mit CRP für die Anwendung in einer Sensorplattform untersucht, die den neuen Ansatz für die Entwicklung biomedizinischer Sensoren zeigt.“

Die Ergebnisse waren überraschend und zeigten ein neues Feld für die elektrochemische Forschung. Das neue Material auf der Elektrode zeigte eine um bis zu zwei Größenordnungen höhere Affinität für CRP als die im ELISA verwendeten Antikörper. Darüber hinaus war die Nachweiseffizienz für das ausgewählte Peptid selbst in Gegenwart von drei störenden Proteinen vielversprechend. Darüber hinaus waren keine zusätzlichen Chemikalien erforderlich, was den Nachweis umweltfreundlicher als mit klassischen Techniken macht.

Darüber hinaus wurden die theoretischen Simulationen, einschließlich computergestützter Modellierungsanalysen, die in Zusammenarbeit mit Prof. Sławomir Filipek von der Universität Warschau durchgeführt wurden, als Ergänzung zu den biologischen und physikalisch-chemischen Studien implementiert und lieferten verblüffende Ergebnisse.

In-silico-Studien erklärten die Besonderheiten der Bindung bestimmter Peptide an CRP. Die Ergebnisse zeigen, welches Peptid aus einer Liste von Optionen der beste CRP-Binder ist und bestätigen die experimentelle Studie. Bisher optimierte die Kombination experimenteller und theoretischer Studien den Screening-Prozess und beschleunigte so die Forschung.

„Der Mehrwert dieser Arbeit liegt in der Integration experimenteller Methoden mit rechnergestützter Modellierungsanalyse. Die Modellierung anhand bekannter Aminosäuresequenzen von Peptiden bestätigt, dass das P3-Peptid das beste Bindemittel für CRP ist. Ein solcher kombinierter Ansatz wurde bisher nicht beschrieben und zeigt dies.“ wie numerische Methoden/In-silico-Analyse aufwändige experimentelle Techniken ersetzen oder verbessern können.“

„Durch die Verwendung von molekularem Docking zur Identifizierung der besten Bindemittel entfällt der Einsatz von Chemikalien, was für die Entwicklung einer umweltfreundlicheren Chemie von entscheidender Bedeutung ist. Diese Studie validiert den numerischen Ansatz zur Identifizierung von Peptidbindungseigenschaften und stellt einen wichtigen Schritt auf dem Weg zu peptidbasierten Sensoren dar. Darüber hinaus Wenn wir wissen, wie das Andocken funktioniert, könnten wir in Zukunft die Sequenz des Peptids anpassen, indem wir beispielsweise eine der Aminosäuren ändern, um das beste Bindungsmolekül an das untersuchte Ziel zu erhalten, wie zum Beispiel Krankheitsbiomarker“, sagt Dr. Szot Karpińska

Ein solcher rechnerischer Ansatz zur CRP-Erkennung mithilfe von Peptiden wurde noch nie zuvor beschrieben und veranschaulicht einen neuen Trend in der Forschung, bei dem Berechnungen aufwändige experimentelle Techniken unterstützen können.

Das vorgeschlagene Verfahren ermöglicht die Überwachung des Entzündungsverlaufs und ermöglicht eine selektive und empfindliche Kontrolle des CRP-Spiegels mit deutlich kleineren und stabileren Molekülen als bisher. Diese Arbeit wäre ohne den Einsatz vieler verschiedener Methoden und Techniken aus verschiedenen Bereichen nicht möglich, was den dringenden Bedarf an Interdisziplinarität in der Wissenschaft, insbesondere im Gesundheitsschutz, beweist.

Es zeigt, wie wichtig es ist, experimentelle Studien mit einer eingehenden Untersuchung intermolekularer Wechselwirkungen zu kombinieren. Die beschriebene Forschung kann die Diagnostik und Behandlung von Entzündungen grundlegend verändern, insbesondere im Fall langfristiger Entzündungsverläufe oder sogar neuartiger Lab-on-the-Chip-Geräte für personalisierte Medizin, Arzneimittelentwicklung und Arzneimittelverabreichung. Das Team sucht nach neuen Rezeptoren für Krankheitsmarker und neuen Lösungen zur Untersuchung molekularer Wechselwirkungen.