Eine neuartige mikrometerdicke poröse Beschichtung mit beispiellosen Fähigkeiten zur Erkennung von Biomarkern

Man geht davon aus, dass die alternde Bevölkerung und die Tendenz zu einem sitzenderen Lebensstil in vielen Teilen der Welt die Zahl der Menschen, die an mehreren chronischen Erkrankungen leiden, dramatisch erhöht. Darüber hinaus erhöhen der Klimawandel sowie veränderte Landnutzungs- und Reisemuster das Risiko von Infektionskrankheiten, die lokal und global auftreten und sich verbreiten können.

Das Vorhandensein und den Verlauf all dieser Krankheiten schnell diagnostizieren zu können, stellt eine wachsende Herausforderung für die Gesundheitssysteme dar – eine Herausforderung, die nur mit Hilfe effektiver Point-of-Care-Diagnosetests (POC) jenseits der Arztpraxis und fortgeschrittener Medizin bewältigt werden kann Einrichtungen.

POC-Tests brachten den Menschen während der COVID-19-Pandemie zahlreiche Vorteile, aber dieser Ansatz muss viel breiter anwendbar werden und es Ärzten und Patienten ermöglichen, tiefer in pathologische Zustände einzutauchen. Aktuelle POC-Diagnosetechnologien messen nur einen einzelnen Krankheitsbiomarker oder manchmal mehrere Biomarker, die zur gleichen Molekülklasse gehören, wie z. B. verschiedene RNAs, Proteine ​​oder Antikörper.

Die Messung mehrerer Biomarker aus verschiedenen Molekülklassen könnte jedoch umfassendere Informationen über den Zustand einer Krankheit, ihre Schwere und ihr Fortschreiten im Laufe der Zeit liefern und sogar individuelle Unterschiede in der Art und Weise ihrer Entwicklung berücksichtigen.

Elektrochemische Biosensoren, die ein chemisches Signal in Form eines Biomarkers, der in einer kleinen Bioflüssigkeitsprobe wie Blut, Speichel oder Urin vorhanden ist, in ein elektrisches Signal umwandeln, dessen Stärke der nachgewiesenen Menge des Biomarkers entspricht, könnten dies liefern Antwort auf viele POC-Diagnoseprobleme.

Im Prinzip können mehrere Sensoren für verschiedene Biomarkermoleküle in gemultiplexten Sensorarrays kombiniert werden, und was noch wichtiger ist: Der Kampf gegen „Biofouling“, die früher unvermeidliche Zerstörung von Elektrodenoberflächen durch in Proben enthaltene unspezifische biologische Moleküle, ist durch die Entwicklung von vermeidbar geworden Am Wyss Institute der Harvard University wurden dünne Antifouling-Beschichtungen entwickelt.

Jetzt hat das Forschungsteam am Wyss Institute zusammen mit mehreren kooperierenden Instituten in Korea die elektrochemische Diagnosesensorik einen entscheidenden Schritt weiter in Richtung einer breiteren Anwendung gebracht, indem sie eine neue poröse Antifouling-Beschichtung aus Nanokomposit entwickelt hat, die eine Dicke von einem Mikrometer hat – dem Durchmesser von ein Bakterium – das etwa 100-mal dicker ist als frühere Beschichtungen.

Die erhöhte Dicke der Beschichtung und ein konstruiertes poröses Netzwerk darin ermöglichten den Einbau einer viel höheren Anzahl von Biomarker-Erkennungssonden in Sensoren und damit eine bis zu 17-fach höhere Empfindlichkeit als bisherige Best-in-Class-Sensoren bei gleichzeitig überlegener Antifouling-Fähigkeit .

In ihrer Proof-of-Concept-Studie haben die Forscher Sensoren entwickelt, die die Fähigkeit zum Nachweis von COVID-19-spezifischen Nukleinsäure-, Antigen- und Wirtsantikörper-Biomarkerzielen in klinischen Proben mit hoher Empfindlichkeit und Spezifität kombinieren. Ihre Erkenntnisse sind veröffentlicht In Naturkommunikation.

„Unsere neuartige dicke poröse Emulsionsbeschichtung geht direkt kritische Hürden an, die derzeit den weit verbreiteten Einsatz elektrochemischer Sensoren als zentrale Komponenten umfassender POC-Diagnostik für viele Erkrankungen verhindern“, sagte Letztautor und Wyss-Gründungsdirektor Donald Ingber, MD, Ph.D .

„Es könnte jedoch weit darüber hinausgehen und auch neue Möglichkeiten für die Entwicklung sichererer und funktionellerer implantierbarer Geräte und anderer Gesundheitsüberwachungssysteme an mehreren Krankheitsfronten eröffnen. Die Überwindung von Biofouling und Empfindlichkeitsproblemen sind Herausforderungen, die sich auf viele dieser Bemühungen auswirken.“

Ingber ist außerdem Judah Folkman Professor für Gefäßbiologie an der Harvard Medical School und dem Boston Children’s Hospital sowie Hansjörg Wyss Professor für Bioinspired Engineering an der Harvard John A. Paulson School of Engineering and Applied Sciences.

Dickere Beschichtung, bessere Erkennung

Im Jahr 2019 veröffentlichte das elektrochemische Sensorprojekt des Wyss Institute sein erstes wegweisendes Papier, in dem über die erste Antifouling-Beschichtung mit beispiellosen Biosensorfähigkeiten berichtet wurde.

In einer Reihe kritischer FolgestudienDas Team steigerte das Potenzial der elektrochemischen Sensorik, indem es die Nanochemie der Beschichtungen weiter weiterentwickelte, um Elektroden noch empfindlicher gegenüber Biomarkern zu machen, wichtige Multiplexfähigkeiten hinzufügte und kostensenkende Herstellungsverfahren entwickelte.

Die fortschrittlichsten Biosensoren, die das Team im Wyss entwickelt hat eRapid-Plattform verfügte über einen Funktionssatz, der sie bereits aktiviert Übersetzung in einige klinische Umgebungen.

Die vom Team verwendete Beschichtungsmethode setzte jedoch den gesamten Sensorchip der Nanokompositlösung aus und ermöglichte nur die Bildung einer relativ dünnen Beschichtung von etwa 10 Nanometern auf der gesamten Sensoroberfläche, was die Funktionalität der Sensoren in mehrfacher Hinsicht einschränkte.

Beispielsweise schränkte der dünne Durchmesser der Beschichtung die maximale Sondenmenge ein, die in sie geladen werden konnte, was besonders bei größeren Multiplex-Sensoren von entscheidender Bedeutung ist, die noch mit kleinen Probenvolumina arbeiten müssen, und umso mehr bei Bemühungen, Multiplex-Sensoren für ihren Einsatz zu miniaturisieren in tragbaren POC-Diagnosegeräten.

„In dieser neuen Studie haben wir eine völlig neue Lösung für dieses Problem gefunden, die zu einer 100-mal dickeren Beschichtung führte. Unser neuer Ansatz nutzt ein Tintenstrahldruckverfahren, das es uns ermöglicht, diese dicke Beschichtung sehr lokal auf einzelne Sensoren aufzutragen.“ Elemente“, sagte der ehemalige Wyss Senior Scientist Pawan Jolly, Ph.D., der maßgeblich an der Entwicklung der eRapid-Plattform beteiligt war.

„Dies eröffnet neue Möglichkeiten: Erstens können wir viel größere Mengen an Biomarker-detektierenden Sonden in die Beschichtung einbauen, und in Zukunft können die Sensoren in komplexen Arrays individuell angesprochen werden, indem Nanokomposit-Chemikalien auf sie angewendet werden, die speziell auf bestimmte Anforderungen ausgerichtet sind.“ Biomarker-Modalitäten.

Anstatt die elektrochemischen Elektroden buchstäblich in eine Beschichtungslösung zu tauchen, wie sie es bei der vorherigen Generation von Sensoren taten, druckten die Forscher eine Schicht einer dichten Öl-in-Wasser-Emulsion durch eine feine Düse auf die Elektroden. Nach dem Verdampfen der winzigen Ölbläschen blieb auf der Elektrodenoberfläche eine 1 Mikrometer dicke Schicht zurück, die aus vernetzten Polymermolekülen des Blutproteins Albumin bestand und miteinander verbundene Poren sowie elektronenleitende Gold-Nanodrähte enthielt.

„Das poröse Netzwerk in dieser Nanokomposit-Beschichtung vergrößert die Oberfläche, die zum Anbringen speziell entwickelter Biomarker-Erkennungssonden verwendet werden kann und gleichzeitig für Probenflüssigkeiten zugänglich ist, erheblich. Dadurch wird die Nachweisempfindlichkeit deutlich erhöht.“ erklärte Erstautor Jeong-Chan Lee, Ph.D., ein Postdoktorand in Ingbers Team.

„Darüber hinaus ermöglicht uns der Düsendruck, die Emulsion ausschließlich auf der Biomarker-detektierenden Arbeitselektrode zu strukturieren, während die benachbarte Referenzelektrode in jedem Sensor davon frei bleibt, was unspezifisches elektrisches Rauschen reduziert und die Spezifität unserer Messungen erhöht.“

Ab COVID-19

Das Team nutzte eine zuvor entwickelte Kombination von Nachweisreagenzien für drei COVID-19-bezogene Biomarker, um mithilfe ihrer neu entwickelten Beschichtungstechnologie ein Sensorelektroden-Array zu strukturieren: einen CRISPR-fähigen Sensor für eine SARS-CoV-2-RNA, einen sensorspezifischen Sensor für ein SARS-CoV-2-Kapsidantigen und einen Sensor für einen virusgerichteten Wirtsantikörper.

Der neue Sensor wurde mit einer Sammlung von Patientenproben getestet und erzielte eine um das 3,75- bis 17-fache höhere Erkennungsempfindlichkeit im Vergleich zu einem früheren Sensor, der mit den gleichen Erkennungssystemen und der besten porenfreien, viel dünneren Beschichtung des Teams hergestellt wurde. Es unterschied außerdem positive von negativen Proben mit 100-prozentiger Genauigkeit (Spezifität).

„Elektrochemische Sensoren mit dieser Beschichtung der nächsten Generation wären ideal für die Überwachung von Virusausbrüchen, Impfreaktionen und das Verständnis von Korrelationen zwischen verschiedenen Biomarkern im Verlauf von Virusinfektionen und könnten in Zukunft auch für andere Krankheiten eingesetzt werden.“ sagte Lee.