Ein fortschrittliches System zur größenabhängigen Zytotoxizitätsanalyse von Kieselsäure

Metallnanomaterialien sind aufgrund ihrer einzigartigen und vielseitigen Eigenschaften zu einem unverzichtbaren Bestandteil in industriellen und medizinischen Bereichen geworden. Ihre Größe, die ihnen die gewünschten physikochemischen Eigenschaften verleiht, gibt auch Anlass zu Umwelt- und Gesundheitsbedenken. Die nanoskaligen Partikel in Nanomaterialien haben eine hohe Reaktivität gegenüber Biomolekülen und oft sogar Toxizität gegenüber biologischen Zellen gezeigt.

Wissenschaftler haben dieses Verhalten von Metallnanopartikeln im Zusammenspiel mit Biomolekülen auf Phänomene wie Entzündungen oder oxidativen Stress zurückgeführt. Um jedoch die sichere Verwendung von Metallnanopartikeln zu gewährleisten, müssen die molekularen Mechanismen untersucht werden, die für die Toxizität verantwortlich sind, und es muss verstanden werden, wie die Aufnahme von Nanopartikeln durch Zellen je nach Form, Größe, Morphologie und anderen Aspekten variiert.

Um Licht in diese Frage zu bringen, haben Assistenzprofessor Yu-ki Tanaka und Prof. Yasumitsu Ogra, beide von der Graduate School of Pharmaceutical Sciences der Universität Chiba, nun die zelluläre Aufnahme von Silica-Nanopartikeln (SiNPs) anhand ihrer Größe geschätzt.

In ihrem jüngsten Durchbruch veröffentlicht in Archiv für Toxikologieentwickelten die Forscher ein AF4-ICP-MS-System (asymmetrische Flussfeld-Flussfraktionierung mit induktiv gekoppelter Plasma-Massenspektrometrie), das SiNPs in fünf verschiedenen Größen (10, 30, 50, 70 und 100 nm) trennte und eine quantitative Bewertung ermöglichte Zytotoxizität von SiNPs in HepG2-Zellen.

„SiNPs haben in verschiedenen Bereichen wie der Arzneimittelverabreichung, der biomedizinischen Bildgebung, bei Katalysatoren sowie bei der Umweltsanierung zur Entfernung von Schadstoffen aus Wasser und Boden an Bedeutung gewonnen. Es bestehen jedoch auch erhebliche Bedenken hinsichtlich ihrer Umwelttoxizität und möglichen Auswirkungen auf lebende Organismen.“ sagt Dr. Tanaka, als er nach der Motivation hinter dieser Studie gefragt wird.

„Um eine Lösung für den Kompromiss zwischen industrieller Verfügbarkeit und Toxizität zu finden, haben wir beschlossen, eine Technik zu entwickeln, um die potenziellen nachteiligen Auswirkungen von SiNPs zu verstehen, indem wir quantitative Daten zur zellulären Aufnahme und toxikologischen Reaktionen kombinieren.“

Größenanalysetechniken wie Elektronenmikroskopie und laserbasierte dynamische Lichtstreuung konnten Nanopartikelproben in tiefen Schichten nicht beobachten und die chemische Zusammensetzung der Nanopartikel nicht aufklären. Um diesen Problemen entgegenzuwirken, führte das Team die neue AF4-ICP-MS-Größenanalysetechnik ein, die nicht nur diese Probleme überwand, sondern auch Nanopartikel mit einer Größe von nur 10 nm entdeckte. Dies wäre mit herkömmlichen ICP-MS-Methoden nicht möglich gewesen.

Das Team nutzte die AF4-basierte Methode, um die zelluläre Aufnahme von SiNPs in im Labor kultivierten menschlichen Hepatom-HepG2-Zellen zu bewerten. Die Messungen zeigten, dass etwa 17 % der den HepG2-Zellen ausgesetzten SiNPs absorbiert wurden. Die vom Team durchgeführte Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) beobachtete das Vorhandensein von SiNP-Aggregaten in den Zellen, was auf die Fähigkeit kleiner Nanopartikel hinweist, sich im Kulturmedium anzusiedeln und leicht in die Zellen einzudringen.

„Wir fanden heraus, dass die kleineren SiNPs eine höhere Toxizität gegenüber den HepG2-Zellen zeigten als die größeren, aber die AF4-ICP-MS-Analyse ergab keinen signifikanten größenabhängigen Unterschied im von den Zellen absorbierten Partikelvolumen“, betont Dr. Tanaka die Ergebnisse der Toxizitätsexperimente. Diese Ergebnisse legen nahe, dass das erhöhte zytotoxische Verhalten der kleinen SiNPs im Vergleich zu den größeren auf der großen Oberfläche im Verhältnis zum Partikelvolumen beruht.

Die Forscher untersuchten auch die chemischen Mechanismen, die mit der Zytotoxizität einhergehen. Die Daten zeigten, dass Zellnekrose teilweise mit oxidativem Stress zusammenhängt, der durch die Produktion reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) verursacht wird. Darüber hinaus waren Wechselwirkungen der Silanolgruppen auf der SiNP-Oberfläche und Phospholipiden in der Zellmembran für die damit verbundene Zellschädigung verantwortlich.

Insgesamt stellen die Ergebnisse die neue AF4-ICP-MS-Technik als leistungsstarkes Werkzeug zur quantitativen Bestimmung der durch Metallnanopartikel unterschiedlicher Größe induzierten Zytotoxizität dar. Die Erkenntnisse aus dieser Studie bieten auch eine solide Grundlage für zukünftige Studien, die sich mit der Bewertung der Risiken der Nanopartikelexposition und ihrer potenziellen Belastung für den menschlichen Körper befassen.

„Ziel unserer Studie war es, eine einfache Analysetechnik zu entwickeln, die uns bei der Minimierung potenzieller Gesundheitsschäden durch Nanopartikel unterstützen würde. Wir hoffen, dass die durch unsere Studie bereitgestellten toxikologischen Informationen dazu beitragen werden, Kriterien für die ordnungsgemäße Verwendung und Regulierung von Nanopartikeln festzulegen.“ in der Industrie, im medizinischen Bereich und sogar in Gegenständen des täglichen Gebrauchs, die Nanopartikel enthalten“, schließt Dr. Tanaka.