Durchbrechen von Barrieren bei der Arzneimittelverabreichung mit besseren Lipid-Nanopartikeln

Viele Krankheiten können in der einfachen Umgebung einer Zellkulturschale erfolgreich behandelt werden, aber um echte Menschen erfolgreich zu behandeln, muss der Wirkstoff eine Reise durch die unendlich komplexere Umgebung unseres Körpers unternehmen und unversehrt in den betroffenen Zellen ankommen. Dieser Prozess, der als Arzneimittelabgabe bezeichnet wird, ist eine der größten Hürden in der Medizin.

Eine Zusammenarbeit zwischen dem Lawrence Berkeley National Laboratory (Berkeley Lab) und Genentech, einem Mitglied der Roche-Gruppe, arbeitet daran, einige der Engpässe bei der Arzneimittelabgabe zu überwinden, indem die effektivsten Lipid-Nanopartikel (LNPs) entwickelt werden – winzige kugelförmige Beutel aus Fettmolekülen die therapeutische Wirkstoffe verkapseln, bis sie an Zellmembranen andocken und ihren Inhalt freisetzen. Das erste Medikament, das LNPs verwendet, wurde 2018 zugelassen, aber die Verabreichungsmethode erlangte mit den mRNA-COVID-Impfstoffen von Pfizer und Moderna weltweite Bedeutung.

„Es ist ein ziemlich intelligentes System, denn wenn man einfach die RNA selbst dem menschlichen Körper zuführt, wird die RNA durch Nukleasen abgebaut und kann aufgrund ihrer Größe und Ladung die Zellmembran nicht leicht passieren, aber die LNPs transportieren sie sicher in die Zelle.“ “ erklärte Co-Hauptautor Chun-Wan Yen, ein leitender leitender Wissenschaftler in der Small Molecule Pharmaceutical Sciences-Gruppe von Genentech.

LNPs werden derzeit umfassend als Verabreichungssystem für Impfstoffe gegen andere Infektionskrankheiten oder therapeutische Impfstoffe gegen Krebs untersucht. Die Realisierbarkeit dieser neuen Anwendungen wird davon abhängen, wie gut die Lipidhüllen mit den Zielzellen verschmelzen, wie stabil die Arzneimittel-LNP-Formulierungen bei der Lagerung sind (so dass sie eine lange Haltbarkeit haben) und wie stabil sie im Körper sind (damit sie eine verlängerte Arzneimittelwirkung verleihen können).

Alle diese Eigenschaften werden durch die Molekülmischung gesteuert, die zur Bildung des LNP verwendet wird, und durch die daraus resultierende 3D-Struktur des Partikels. Das Team um Yen und die Co-Leiter Greg Hura und Michal Hammel, beide Biophysiker des Berkeley Lab, untersuchen seit mehreren Jahren, wie die Struktur von LNPs auf gewünschte Eigenschaften abgestimmt werden kann.

Ihr neuester Artikel wurde kürzlich veröffentlicht in ACS Nanodokumentiert, wie ein Hochdurchsatz-Workflow es ihnen ermöglicht, LNPs in Rekordgeschwindigkeit herzustellen und zu charakterisieren. Die Studie umfasst auch den ersten Nachweis, wie die LNP-Struktur mit der Aktivität ihres Inhalts korreliert, bei dem es sich bei dieser Untersuchung um ein Antisense-Oligonukleotid (ASO) handelte. ASOs sind kleine Schnipsel von RNA- oder DNA-Basenpaaren, die die Genexpression blockieren, indem sie an mRNA-Stränge binden und verhindern, dass sie in Proteine ​​übersetzt werden. ASOs sind eine großartige Möglichkeit, Krankheiten zu behandeln, die durch fehlerhafte Proteine ​​oder den Überschuss eines Proteins verursacht werden. Aber wie mRNA sind sie anfällig für wandernde Nukleasen – Enzyme, die RNA und DNA abbauen – und Zellen nehmen sie nicht ohne weiteres auf.

Die Wissenschaftler fanden heraus, dass ASO-tragende LNPs mit sauber geordneten, dicht gepackten inneren Strukturen im Vergleich zu LNPs mit einer ungeordneteren Struktur zu einer besseren Stummschaltung eines fehlerhaften Gens in menschlichen Neuronen führten, das mit einer degenerativen Erkrankung in Zusammenhang steht. Die Ergebnisse stammten aus zellulären Aktivitäten und nicht aus Tierversuchen, es liegt also noch viel Arbeit vor uns, aber das Team freut sich darauf, auf diesen Erkenntnissen aufzubauen und dabei die komplementären Instrumente jeder Institution zu nutzen.

„Wir erzeugen die LNPs im Hochdurchsatz und das Team von Greg und Michal kann die Hochdurchsatzanalyse anbieten“, sagte Yen. „Wenn man sich heutzutage die Veröffentlichung ansieht, machen sie normalerweise nur ein oder zwei Formulierungen, aber bei uns ist das anders. Wir können große Datensätze generieren, und ich denke, das ist der Grund, warum wir zu diesem sehr einzigartigen und coolen Ergebnis kommen können.“

„Dieses Papier legt wirklich die Methode dar, die wir auf die Tausenden anderer Formulierungen anwenden werden, die wir charakterisieren wollen“, fügte Hura hinzu, die Teil der Biosciences Area des Berkeley Lab ist. „Wir hoffen, dass dies eine allgemeine Methode für Menschen sein wird, um ihre Lipid-Nanopartikel zu optimieren. Ob es nun um Impfstoffe geht, und auch hier haben die Impfstoffe bisher oder darüber hinaus die größte Aufmerksamkeit erhalten. Diese Art der Therapie hat darüber hinaus eine sehr breite Anwendung.“ .“

Wie baut man ein Lipid-Nanopartikel auf?

Die Struktur von LNPs wird davon beeinflusst, wie Sie sie mischen, was Sie zusammenmischen und in welcher Reihenfolge. LNPs bestehen aus vier Bestandteilen – ionisierbare Lipide, Helfer-Phospholipide, Cholesterin und Polyethylenglykol-Lipide (PEG-Lipide) – und jeder Bestandteil hat unterschiedliche Formen. Außerdem können sie in unterschiedlichen Verhältnissen kombiniert werden, was zu einer exponentiellen Anzahl möglicher Formeln führt. Erschwerend kommt hinzu, dass sich die LNPs mit der Zeit ändern. Eine Formulierung, die als ordentliche, dicht gepackte Kugel beginnt, wird sich schließlich in eine ungeordnetere Struktur verwandeln.

Wissenschaftler von Genentech haben einen robotergesteuerten Arbeitsablauf entwickelt, der in nur wenigen Stunden Hunderte von LNP-Formulierungen erzeugen kann. Proben jeder Formulierung werden dann zum Berkeley Lab gebracht, um an der Advanced Light Source, einem kreisförmigen Teilchenbeschleuniger, der Röntgenstrahlen unterschiedlicher Energie erzeugt, Kleinwinkel-Röntgenstreuung (SAXS) durchzuführen.

Die biologische SAXS-Beamline kann viele Proben schnell verarbeiten, und im Gegensatz zu anderen Formen der Röntgenbeugung an biologischen Materialien müssen die Proben nicht eingefroren oder kristallisiert werden – was die Struktur der LNPs verändern und die Wissenschaftler daran hindern könnte, herauszufinden, was das ist LNPs würden bei physiologischen Temperaturen im menschlichen Körper aussehen. Mit SAXS können sie außerdem zu bestimmten Zeitpunkten Schnappschüsse von LNPs erstellen, um deren strukturelle Langlebigkeit zu bestimmen.

Darüber hinaus untersucht das Genentech-Team mithilfe eines beschleunigten Prozesses, wie LNPs die Genexpression in ihren Zielzellen beeinflussen. Durch die Kombination all dieser beschleunigten Techniken ist die gesamte Zusammenarbeit in der Lage, potenzielle LNPs mit beispielloser Geschwindigkeit zu überprüfen.

Yen plant, die SAXS-Beamline weiterhin zu nutzen, um kleine Details zu untersuchen, etwa wie sich eine 1-prozentige Änderung der Zutatenkonzentration oder der Einsatz einer neuen Maschine während der Produktion auf die Zellaktivität von LNP auswirken kann, sowie große Fragen, etwa ob sich LNPs gegebenenfalls anders verhalten Transport anderer Frachtarten und wie diese mit verschiedenen Zielzellen interagieren.

„Wir wissen, dass mRNA-LNPs funktionieren, aber es gibt immer noch eine große Wissenslücke“, sagte Yen. „Deshalb bin ich der Meinung, dass unser Papier ein Pionier auf diesem Gebiet ist und wir hoffen, dass wir auch mehr Daten und Verständnis für zukünftige Anwendungen generieren können.“