Von Nanopartikeln gelieferte RNA reduziert Neuroinflammation in Labortests

Einige COVID-19-Impfstoffe werden sicher und effektiv eingesetzt Lipid-Nanopartikel (LNPs), um Boten-RNA an Zellen zu transportieren. Eine neue MIT-Studie zeigt, dass verschiedene Nanopartikel für eine mögliche Therapie der Alzheimer-Krankheit (AD) eingesetzt werden könnten. In Tests in mehreren Mausmodellen und mit kultivierten menschlichen Zellen lieferte eine neu zugeschnittene LNP-Formulierung effektiv Small Interfering RNA (siRNA) an die Mikroglia-Immunzellen des Gehirns, um die Expression eines Proteins zu unterdrücken, das mit übermäßiger Entzündung bei der Alzheimer-Krankheit verbunden ist.

In einer früheren Studie haben die Forscher zeigte dass die Blockierung der Folgen der PU.1-Proteinaktivität dazu beiträgt, die mit der Alzheimer-Krankheit verbundene Neuroinflammation und Pathologie zu reduzieren. Die neuen Ergebnisse, gemeldet im Tagebuch Fortgeschrittene Werkstoffeerreichen eine Verringerung der Entzündung, indem sie die Expression des Spi1-Gens, das für PU.1 kodiert, direkt unterdrücken.

Generell zeigt die neue Studie auch einen neuen Weg auf, RNA an Mikroglia zu transportieren, die bisher schwer zu erreichen waren.

Die Co-Autorin der Studie, Li-Huei Tsai, Picower-Professorin für Neurowissenschaften und Direktorin des Picower Institute for Learning and Memory and Aging Brain Initiative, sagte, sie habe die Hypothese aufgestellt, dass LNPs als Möglichkeit dienen könnten, siRNA in die Mikroglia zu bringen, weil die Zellen sich klären Abfallstoffe im Gehirn haben eine starke Neigung zur Aufnahme von Lipidmolekülen.

Sie besprach dies mit Robert Langer, Professor am David Koch-Institut, der weithin für seine wegweisenden Arbeiten zur Arzneimittelabgabe durch Nanopartikel bekannt ist; Sie beschlossen, die Idee der Reduzierung der PU.1-Expression mit einer von LNP gelieferten siRNA zu testen.

„Ich erinnere mich noch an den Tag, als ich um ein Treffen mit Bob bat, um die Idee zu besprechen, LNPs als Nutzlast zur Bekämpfung entzündlicher Mikroglia zu testen“, sagte Tsai, Fakultätsmitglied in der Abteilung für Gehirn- und Kognitionswissenschaften. „Ich bin der JPB Foundation sehr dankbar, die diese Idee ohne vorläufige Beweise unterstützt hat.“

Der Doktorand des Langer Lab, Jason Andresen, und der ehemalige Postdoktorand des Tsai Lab, William Ralvenius, leiteten die Arbeit und sind die Co-Hauptautoren der Studie. Owen Fenton, ein ehemaliger Postdoc am Langer Lab, der jetzt Assistenzprofessor an der Eshelman School of Pharmacy der University of North Carolina ist, ist neben Tsai und Langer Co-Korrespondentautor. Langer ist Professor für Chemieingenieurwesen, Bioingenieurwesen und am Koch-Institut für integrative Krebsforschung.

Ein Teilchen perfektionieren

Der einfachste Weg, um zu testen, ob siRNA die PU.1-Expression therapeutisch unterdrücken könnte, wäre die Verwendung eines bereits verfügbaren Abgabegeräts gewesen, aber eine der ersten Entdeckungen in der Studie ist, dass keines der acht kommerziell erhältlichen Reagenzien Kulturen sicher und effektiv transfizieren konnte menschliche Mikroglia-ähnliche Zellen im Labor.

Stattdessen musste das Team einen LNP optimieren, um diese Aufgabe zu erfüllen. LNPs bestehen aus vier Hauptbestandteilen, und durch die Änderung der Struktur von zwei von ihnen und die Variation des Verhältnisses von Lipiden zu RNA konnten die Forscher sieben Formulierungen zum Ausprobieren entwickeln. Wichtig ist, dass ihre Tests das Ausprobieren ihrer Formulierungen an kultivierten Mikroglia umfassten, die sie in einen entzündlichen Zustand versetzt hatten. Schließlich ist dieser Zustand derjenige, in dem die vorgeschlagene Behandlung erforderlich ist.

Unter den sieben Kandidaten zeichnete sich das Team mit dem Namen „MG-LNP“ durch eine besonders hohe Liefereffizienz und Sicherheit einer Test-RNA-Fracht aus.

Was in einer Schüssel funktioniert, funktioniert in einem lebenden Organismus manchmal nicht. Deshalb testete das Team als Nächstes die Wirksamkeit und Sicherheit seiner LNP-Formulierungen an Mäusen. Sie testeten zwei verschiedene Injektionsmethoden, in den Körper oder in die Liquor cerebrospinalis (CSF), und stellten fest, dass die Injektion in den Liquor eine viel größere Wirksamkeit bei der Bekämpfung von Mikroglia gewährleistete, ohne Zellen in anderen Organen zu beeinträchtigen.

Unter den sieben Formulierungen erwies sich MG-LNP erneut als die wirksamste bei der Transfektion von Mikroglia. Langer sagte, er glaube, dass dies eines Tages möglicherweise neue Möglichkeiten zur Behandlung bestimmter Gehirnerkrankungen mit Nanopartikeln eröffnen könnte.

Eine gezielte Therapie

Nachdem sie wussten, dass MG-LNP sowohl in menschlichen Zellkulturen als auch in Mäusen eine Testladung an Mikroglia abgeben kann, testeten die Wissenschaftler anschließend, ob die Verwendung von MG-LNP zur Abgabe einer PU.1-unterdrückenden siRNA Entzündungen in Mikroglia reduzieren könnte. In den Zellkulturen führte eine relativ niedrige Dosis zu einer Reduzierung der PU.1-Expression um 42 Prozent (was gut ist, da Mikroglia zum Leben mindestens etwas PU.1 benötigen).

Tatsächlich hat die MG-LNP-Transfektion den Zellen keinen Schaden zugefügt. Es reduzierte auch deutlich die Transkription der Gene, die die PU.1-Expression in Mikroglia erhöhen, was darauf hindeutet, dass es mehrere Entzündungsmarker reduzieren kann.

Bei all diesen und anderen Maßnahmen übertraf MG-LNP ein kommerziell erhältliches Reagenz namens RNAiMAX, das die Wissenschaftler parallel testeten.

„Diese Ergebnisse unterstützen den Einsatz der MG-LNP-vermittelten Anti-PU.1-siRNA-Verabreichung als potenzielle Therapie für neuroinflammatorische Erkrankungen“, schrieben die Forscher.

Die letzte Reihe von Tests bewertete die Leistung von MG-LNP und lieferte die siRNA in zwei Mausmodellen für Entzündungen im Gehirn. In einem Fall wurden Mäuse LPS ausgesetzt, einem Molekül, das eine Infektion simuliert und eine systemische Entzündungsreaktion stimuliert. Im anderen Modell zeigen Mäuse eine schwere Neurodegeneration und Entzündung, wenn ein Enzym namens CDK5 durch ein Protein namens p25 hyperaktiviert wird.

In beiden Modellen reduzierte die Injektion von MG-LNPs, die die Anti-PU.1-siRNA tragen, die Expression von PU.1 und Entzündungsmarkern, ähnlich wie in kultivierten menschlichen Zellen.

„Die MG-LNP-Abgabe von Anti-PU.1-siRNA kann möglicherweise als entzündungshemmendes Therapeutikum bei Mäusen mit systemischer Entzündung und im CK-p25-Mausmodell einer AD-ähnlichen Neuroinflammation eingesetzt werden“, schlussfolgerten die Wissenschaftler und nannten die Ergebnisse a „Beweis des Prinzips.“ Bevor die Idee an menschlichen Patienten ausprobiert werden kann, sind weitere Tests erforderlich.